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Corning康寧澳洲胎牛血清使用中常會(huì)碰到的問(wèn)題是什么

更新時(shí)間:2017-06-09瀏覽:1814次

   我們?cè)趹?yīng)用Corning康寧澳洲胎牛血清的過(guò)程中,常會(huì)遇到一些問(wèn)題,該如何應(yīng)對(duì)呢。我們根據(jù)經(jīng)驗(yàn)整理如下:

  1、如何儲(chǔ)存和解凍Corning康寧澳洲胎牛血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

  將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

  長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清,并避免反復(fù)凍融。

  建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí),請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶,建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)(由于血清結(jié)凍時(shí)體積會(huì)增加約10 %, 必須預(yù)留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形),再放回冷凍。

  2、Corning康寧澳洲胎牛血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?

  沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀,因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以,使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃,沉淀會(huì)自然消失。

  3、如何避免Corning康寧澳洲胎牛血清中產(chǎn)生沉淀?

  按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:

  (1)解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。

  (2)血清分裝凍存時(shí),須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。

  (3)勿將血清置于37℃太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。

  (4)勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

  (5)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟。

  (6)若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高,時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。

  4、胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?

  一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài),黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染,微生物則會(huì)大量繁殖,培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。

  如果在鏡下觀察細(xì)胞,生長(zhǎng)狀態(tài)良好,與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比,沒(méi)有任何變化,那么黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān):

  (1)細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)老,破碎的細(xì)胞殘骸;

  (2)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格??蓱?yīng)用離心、過(guò)濾的方法去除這些黑點(diǎn);

  (3)血清質(zhì)量不好,反復(fù)凍融的結(jié)果;

  (4)配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細(xì)胞生長(zhǎng);

  (5)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn),可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除。