組份 | 蓋子顏色 |
Cell Extraction Buffer 細(xì)胞提取緩沖液 | 綠色 |
Extraction Enzyme Dilution Buffer 提取酶稀釋緩沖液 | 紫色 |
Cell Extraction Enzyme 細(xì)胞提取酶 | 黃色 |
Pre-Amp Buffer 預(yù)擴(kuò)增緩沖液 | 紅色 |
Pre-Amp Enzyme 預(yù)擴(kuò)增酶 | 白色 |
Amplification Buffer 擴(kuò)增緩沖液 | 桔色 |
Amplification Enzyme 擴(kuò)增酶 | 藍(lán)色 |
Nuclease-Free water 無(wú)核酸酶水 | 無(wú)色 |
User Manual 使用手冊(cè) |
試劑量可供50次反應(yīng)。
B PicoPLEX WGA Kit儲(chǔ)存與處理
-20℃儲(chǔ)存。
使用前,細(xì)胞提取酶、預(yù)擴(kuò)增酶和擴(kuò)增酶組份放到冰上。其他組份使用前在冰上解凍并且稍微漩渦振蕩(vortex and quick-spin)。
試劑儲(chǔ)存、處理和反應(yīng)設(shè)置都要遵守實(shí)驗(yàn)室PCR操作規(guī)范。
C單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒其他準(zhǔn)備材料
熱循環(huán)儀(PCR儀,推薦使用實(shí)時(shí)PCR儀)
PCR管或96孔PCR板
低吸附吸頭(Low-binding barrier tips)
磷酸鹽緩沖液(PBS)
D PicoPLEX WGA Kit 單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒產(chǎn)品描述
單管,3步,PicoPlEX WGA試劑盒專門用于人單細(xì)胞和pg級(jí)DNA的擴(kuò)增,具有可重復(fù)性、低背景的特點(diǎn)。3小時(shí)內(nèi)完成細(xì)胞裂解、熱循環(huán)文庫(kù)制備和低背景擴(kuò)增,zui終能得到2-5µg擴(kuò)增DNA。
PicoPLEX單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增流程
細(xì)胞+裂解/提取緩沖液,15min ——預(yù)擴(kuò)增混合液,90min ——擴(kuò)增混合液,30min ——分析
PicoPLEX WGA Kit適用樣本
1.1-10個(gè)人細(xì)胞,如:囊胚細(xì)胞、極體、滋胚層細(xì)胞、羊水細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞、培養(yǎng)細(xì)胞等。
2.1000-10000個(gè)細(xì)菌細(xì)胞
3.分離DNA(15pg-50pg人DNA)
4.分選染色體(Sorted Chromosomes )
5.不完整或片段化,單/雙鏈DNA
6.樣本zui大體積:5µL
E PicoPLEX WGA全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物應(yīng)用
拷貝數(shù)變異(CNV)分析,基于oligonucleotide aCGH, BAC aCGH, or qPCR
SNP 基因表型
突變檢測(cè)
F PicoPLEX單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增細(xì)胞樣本采集
細(xì)胞采集方法
兼容PicoPLEX WGA Kit的正確細(xì)胞采集方法有流式分選術(shù),稀釋和顯微操作。細(xì)胞染色后可能會(huì)對(duì)試劑盒性能造成不好影響。為了得到*結(jié)果,一定要避免使用福爾馬林固定法。
細(xì)胞洗滌
細(xì)胞樣本制備時(shí)強(qiáng)烈推薦用PBS洗滌,以盡量減少非細(xì)胞DNA污染。選擇不含鎂、鈣、BSA的PBS。zui終細(xì)胞樣本中所含PBS體積不能超過(guò)2.5µL。
G 使用擴(kuò)增后的對(duì)照DNA作為參照
DNA對(duì)照樣本對(duì)于某些如微陣列和qPCR平臺(tái)有參照價(jià)值。為了得到更準(zhǔn)確的結(jié)果,強(qiáng)烈推薦PicoPLEX擴(kuò)增樣本的對(duì)照選擇PicoPLEX擴(kuò)增后的DNA對(duì)照而不是沒有擴(kuò)增的DNA對(duì)照。
DNA對(duì)照樣本按樣本配制方法(J)配制,按PicoPLEX操作步驟(K)擴(kuò)增。Pooling DNA對(duì)照的擴(kuò)增反應(yīng)的產(chǎn)物可以得到*結(jié)果。
H PicoPLEX WGA全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物純化和定量
WGA單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物用于下游時(shí),許多應(yīng)用使用前需要純化和定量。純化方法可以使用 spin columns或過(guò)濾板。
產(chǎn)物定量使用紫外吸光度法(UV absorbance ,1 OD260 = 50 µg/mL)。PicoGreen™或其他雙鏈DNA定量法所得PicoPLEX產(chǎn)物密度可能不可靠。
純化后的PicoPLEX擴(kuò)增產(chǎn)物-20 °C儲(chǔ)存。
I 選擇合適的反應(yīng)管/反應(yīng)板
PicoPLEX操作指南的步驟7中,如果孵育時(shí)PCR管/板密封性不夠,會(huì)造成大量(>5 µL)的試劑蒸發(fā),zui終影響PicoPLEX WGA結(jié)果的穩(wěn)定性和重復(fù)性。
步驟7也可以加15 µL 水,無(wú)視所選反應(yīng)管/板密封性能否盡量減少蒸發(fā)造成的體積損失。(A mock PicoPLEX Protocol Step 6 incubation using 15 µL of water is advised to confirm whether a selected tube or plate/seal combination can be used with minimal volume loss due to evaporation.)
J樣本配制方法
5µL細(xì)胞樣本
1.依照F所述方法用PBS稀釋或淋洗細(xì)胞。
2.如果采用流式分選采集細(xì)胞:
單個(gè)細(xì)胞加入含5 µL細(xì)胞提取緩沖液(綠蓋)的PCR管/孔。
如果采用顯微操作或稀釋法:
單個(gè)細(xì)胞先用zui少PBS(<2.5 µL))混合,再加入含適量細(xì)胞提取緩沖液(綠蓋)的PCR管/孔,zui終樣本體積5 µL。
5µL DNA樣品(單細(xì)胞simulation)
1.配制1 ng/µL 純化DNA溶液:PCR管/孔中,5 mM Tris-HCl (pH8.0)稀釋對(duì)照DNA。
2.漩渦振蕩30s。
3.配制15 pg/µL DNA溶液:3µL 1 ng/µL DNA溶液+197 µL 5 mM Tris-HCl (pH 8.0)。
4.漩渦振蕩30s。
5.PCR管/孔中,1 µL 15 pg/µL DNA溶液+ 4 µL 細(xì)胞提取緩沖液(綠蓋)。
K PicoPLEX操作步驟
細(xì)胞提取
1.添加提取混合液各組份并充分混勻。
Extraction Cocktail Component 提取混合液組份 | 蓋子顏色 |
Extraction Enzyme Dilution Buffer 提取酶稀釋緩沖液 | 紫色 |
Cell Extraction Enzyme細(xì)胞提取酶 | 黃色 |
2.每5µL細(xì)胞樣本或DNA樣本(J部分配制)加5 µL新鮮配制的提取混合液。
3.按下表在熱循環(huán)儀中孵育樣本:
1 cycle | 75 °C | 10 min |
1 cycle | 95 °C | 4 min |
1 cycle | 室溫 | Hold |
4.試管/板稍微離心。
預(yù)擴(kuò)增
5.添加預(yù)擴(kuò)增混合液各組份并充分混勻。
Pre-Amp Cocktail Component 預(yù)擴(kuò)增混合液各組份 | 蓋子顏色 |
Pre-Amp Buffer 預(yù)擴(kuò)增緩沖液 | 紅色 |
Pre-Amp Enzyme 預(yù)擴(kuò)增酶 | 白色 |
6.每個(gè)細(xì)胞樣本/DNA樣本加5µL預(yù)擴(kuò)增混合液。
7.按下表在熱循環(huán)儀中孵育樣本:
1 cycle | 95°C | 2 min |
12 cycles | 95°C | 15 s |
15°C | 50 s | |
25°C | 40 s | |
35°C | 30 s | |
65°C | 40 s | |
75°C | 40 s | |
1 cycle | 4°C | Hold |
8.稍微離心,預(yù)擴(kuò)增孵育產(chǎn)物放到冰上。
擴(kuò)增
9.添加擴(kuò)增混合液各組份并充分混勻。
Amplification Cocktail Component 擴(kuò)增混合液組份 | 蓋子顏色 |
Amplification Buffer 擴(kuò)增緩沖液 | 桔色 |
Amplification Enzyme 擴(kuò)增酶 | 藍(lán)色 |
Nuclease-Free Water 無(wú)核酸酶水 | 透明 |
注意:樣本擴(kuò)增效率可以通過(guò)在擴(kuò)增混合液中添加SYBR Green I dye(zui終密度:0.125x)進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR儀分析。一些儀器需要額外添加其他染色劑做信號(hào)歸一化(signal normalization)。
10. 新鮮配制的擴(kuò)增混合液取60 µL和15 µL預(yù)擴(kuò)增孵育產(chǎn)物混合,吸管混勻。
11.按下表在熱循環(huán)儀中擴(kuò)增樣本:
1 cycle | 95 °C | 2 min |
14 cycles | 95°C | 15 s |
65°C | 1 min | |
75°C | 1 min | |
1 cycle | 4°C | hold |
注意:基于Rubicon用流式分選培養(yǎng)細(xì)胞的測(cè)試,推薦14 cycles。一些細(xì)胞類型要獲得zui高產(chǎn)量,可能需要更多cycles(zui高達(dá)16 cycles)。
12.PicoPLEX 擴(kuò)增產(chǎn)物立即 -20 °C儲(chǔ)存或用于下游純化(見H)。
RB3050 Rubicon PicoPLEX WGA Kit 單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒說(shuō)明書由華雅再生醫(yī)學(xué)旗艦公司:紅榮微再翻譯。
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RB3050 Rubicon PicoPLEX WGA Kit 單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒
從單細(xì)胞中擴(kuò)增DNA構(gòu)建高重復(fù)性的文庫(kù)現(xiàn)在成為可能。PicoPLEX WGA kit采用技術(shù),設(shè)計(jì)、優(yōu)化用于從單細(xì)胞中擴(kuò)增單拷貝基因組DNA。起始量低至單細(xì)胞或6pg基因組DNA。便捷的單管操作流程減少失誤,節(jié)省時(shí)間并降低反應(yīng)背景。
PicoPLEX WGA Kit兼容微陣列比較基因組雜交(array CGH)分析及PCR平臺(tái),被試管嬰兒行業(yè)供應(yīng)商如BlueGnome信賴并用于PGS/PGD。
產(chǎn)品訂購(gòu)信息
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
RB3050/R30050 | PicoPLEX WGA Kit單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒,array CGH、PCR分析用 | 50次反應(yīng) |
RB3381/R300381 | PicoPLEX DNA-seq Kit,48種雙端illumina引物 | 48 |
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紅榮微再(上海)生物工程技術(shù)有限公司以“傳遞科學(xué)價(jià)值,服務(wù)科學(xué)研究”為宗旨,主營(yíng):干細(xì)胞、醫(yī)療、細(xì)胞治療、器官再生 四大板塊的產(chǎn)品。
紅榮微再醫(yī)療宣傳冊(cè)
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