CAR-T細胞凍存袋分享CAR-T細胞凍存方法,包括以下步驟:
(1)將培養(yǎng)的CAR-T細胞轉(zhuǎn)移至離心管中,在200-500g條件下,離心5-8min,棄掉上清液;
(2)將離心后的細胞團先用DPBS重懸,確認細胞團被*打碎,在磁力架上靜止2-5分鐘,實現(xiàn)細胞跟磁珠的分離;
(3)用移液管將細胞懸液轉(zhuǎn)移至新的離心管中,重復去磁珠操作兩次;
(4)將清除磁珠后的細胞懸液在200-500g條件下,離心5-8min,棄掉上清液,備用;
(5)根據(jù)需要凍存的細胞總數(shù)量,計算凍存介質(zhì)的體積,將細胞重懸于凍存介質(zhì)中;
(6)將細胞分裝于凍存管或者凍存袋中,放置于-80℃超低溫冰箱中緩慢冷凍8-18小時,或者放置于程序降溫儀中按照相應程序降溫至-85℃;降溫結(jié)束后,將細胞凍存管或者凍存袋轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存。
回輸需要時,在液氮條件下運送至治療醫(yī)院,在37℃條件下快速解凍后,可以直接回輸給治療病人。
所述步驟5中的凍存介質(zhì)由氯化鈉、二甲基亞砜、葡萄糖、人血白蛋白、低分子葡聚糖和RPMI-1640基礎培養(yǎng)基組成,其中氯化鈉的質(zhì)量濃度為0.45-0.9%,二甲基亞砜溶液的體積濃度為5-15%,葡萄糖的質(zhì)量濃度為5-20%、人血白蛋白的質(zhì)量濃度為10-50%,低分子葡聚糖的質(zhì)量濃度為5-20%。
優(yōu)選的,所述步驟5中的凍存介質(zhì),其中氯化鈉的質(zhì)量濃度為0.9%,二甲基亞砜溶液的體積濃度為10-15%,葡萄糖的質(zhì)量濃度為5-10%、人血白蛋白的質(zhì)量濃度為10-30%,低分子葡聚糖的質(zhì)量濃度為5-10%。
進一步優(yōu)選的,所述步驟5中的凍存介質(zhì),其中氯化鈉的質(zhì)量濃度為0.9%,二甲基亞砜溶液的體積濃度為10%,葡萄糖的質(zhì)量濃度為5%,人血白蛋白的質(zhì)量濃度為10%,低分子葡聚糖的質(zhì)量濃度為5%。
所述步驟5中CAR-T細胞的凍存密度為1×106個/ml-500×106個/ml。