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心肌分化試劑盒的凍存方法

更新時間:2016-01-21瀏覽:1704次

   心肌分化試劑盒具備心肌定向分化能力,可用于人多潛能干細(xì)胞(hESC/iPSC)向心肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化。分化獲得的心肌細(xì)胞表達(dá)常規(guī)的心肌特異性基因,包括多種收縮蛋白和離子通道。同時,心肌細(xì)胞具備典型的心肌細(xì)胞電生理活性,能夠?qū)﹄娚砗蜕锘瘜W(xué)刺激做出心肌細(xì)胞的常規(guī)反應(yīng)。分化獲得的心肌細(xì)胞,各項特征與人體內(nèi)心肌細(xì)胞高度相似,適合于基礎(chǔ)和臨床科學(xué)研究等。

  心肌分化試劑盒包含有多肽類分化因子和涉及心肌細(xì)胞分化關(guān)鍵信號通路的調(diào)控因子的無血清培養(yǎng)基。在對人ESCs和iPSC不同細(xì)胞系的實驗中,本試劑盒能得到心肌細(xì)胞分化效率比所有已發(fā)表方法都高的結(jié)果。

  心肌分化試劑盒的特點主要有以下幾點:

  1.單層培養(yǎng),均質(zhì)分化

  2.多細(xì)胞系可重復(fù)性好

  3.跳動層細(xì)胞7天即可觀察

  4.誘導(dǎo)分化程序簡單便捷

  心肌分化試劑盒的凍存方法:

  1、如果需要將心肌細(xì)胞長期保存,可對心肌細(xì)胞進(jìn)行凍存,凍存操作會導(dǎo)致40%左右的細(xì)胞死亡。

  2、37℃水浴預(yù)熱PBS溶液和Accutase傳代工作液,4℃預(yù)冷心肌分化試劑盒。

  3、吸走心肌維持培養(yǎng)基,并且加入PBS溶液洗一次。

  4、加入Accutase傳代工作液使之*覆蓋皿/瓶底。

  5、37℃孵育15-20分鐘,顯微鏡下觀察到大部分細(xì)胞相互分離,表面細(xì)胞消化時間理想。

  6、用槍扇形吹打培養(yǎng)皿/瓶底,使皿/瓶底貼附的心肌細(xì)胞脫落,將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,再向皿/瓶中加入適量PBS溶液潤洗皿/瓶底,收集剩余細(xì)胞加入15ml離心管中。(注:吹打力度要輕柔,避免損傷心肌細(xì)胞)

  7、200g離心5分鐘。棄去上清,用重懸細(xì)胞,輕柔吹打混勻。

  8、按復(fù)蘇所需要的量,1ml每管凍存。

  9、以1℃每分鐘的速率降至-80℃過夜(一般常見商品化凍存盒均可提供此條件)。

  10、-80℃過夜后,將凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)移至液氮保存。

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