神經干細胞培養(yǎng)基的自然篩選法

　　神經干細胞培養(yǎng)基自然篩選法是迄今應用，也是zui簡單和容易操作且行之有效的方法。其原理是利用特殊的培養(yǎng)基使成熟的神經細胞無法較長時間地成活，而分離篩選出能夠在該培養(yǎng)條件下存活并增殖的神經干細胞群體。首先將含神經干細胞的神經組織通過機械或酶解分散等方法制備成單細胞，然后培養(yǎng)于含有特殊營養(yǎng)添加劑和促增殖因子的不含血清的培養(yǎng)液中。非神經干細胞在這種培養(yǎng)系統(tǒng)中由于營養(yǎng)缺陷無法較長時間地存活，而神經干細胞則適應該培養(yǎng)體系并在促增殖因子作用下生長增殖。因此，經過培養(yǎng)一段時間之后，就可獲得通過這種自然篩選而增殖形成的呈神經球狀生長的神經干細胞群體。這種利用特殊培養(yǎng)基自然篩選神經干細胞方法的優(yōu)點是：簡便易行，不需要特殊的儀器設備等條件，分離效率高，神經干細胞損傷小易于成活。

　　神經干細胞體外培養(yǎng)另外很重要的一點就是如何盡量讓其少分化或不分化，除了神經干細胞本身的特性決定了一部分不對稱分裂的細胞必將發(fā)生自主分化外，培養(yǎng)條件對神經干細胞的分化與否影響很大，比如在培養(yǎng)中發(fā)現，將神經干細胞球培養(yǎng)于塑料器皿，其黏附于器皿表面并發(fā)生分化的可能要比培養(yǎng)于玻璃器皿的高很多。另外，某些底物如多聚賴氨酸或多聚尿氨酸、作為細胞外基質的的層黏臉蛋白、膠原等都能在無特殊誘導劑存在的情況下，促進神經干細胞的貼壁而分化。神經干細胞在體外分化的形態(tài)表現為由圓形變成帶有明顯突起、形態(tài)各異的神經細胞，懸浮的神經球出現貼壁呈圓盤狀，形態(tài)各異的細胞向周圍呈放射狀長出并遷移，甚至全部細胞均分化平鋪于器皿上生長。