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康為世紀(jì) 無內(nèi)毒素質(zhì)粒中提試劑盒
產(chǎn)品名稱:康為世紀(jì) 無內(nèi)毒素質(zhì)粒中提試劑盒產(chǎn)品貨號:CW2105S英文名稱:EndoFree Plasmid Midi Kit 產(chǎn)品規(guī)格:50 preps
產(chǎn)品介紹:
內(nèi)毒素是質(zhì)粒提取中常見的污染物,由于真核細(xì)胞對內(nèi)毒素非常敏感,因此,如果質(zhì)粒中含有內(nèi)毒素會大大降低真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。本試劑盒提供一種簡單、快捷、高效提取無內(nèi)毒素質(zhì)粒的新方法,提取的質(zhì)粒最大限度去除內(nèi)毒素,并能有效去除基因組DNA、RNA、蛋白等污染。
本試劑盒適合提取5-15ml菌液,在堿裂解法裂解細(xì)胞的基礎(chǔ)上通過新型硅基質(zhì)膜高效專一的結(jié)合質(zhì)粒DNA,每個吸附柱最高可吸附100 μg的質(zhì)粒DNA,同時采用特殊的緩沖液系統(tǒng)和除內(nèi)毒素過濾柱,有效去除內(nèi)毒素、蛋白等雜質(zhì)。由本試劑盒所得質(zhì)粒純度高、質(zhì)量穩(wěn)定,特別適用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染,同時也可用于DNA測序,PCR,基于PCR的突變,體外轉(zhuǎn)錄,轉(zhuǎn)化細(xì)菌,內(nèi)切酶消化等下游實驗。
產(chǎn)品名稱:康為世紀(jì) 無內(nèi)毒素質(zhì)粒中提試劑盒
產(chǎn)品貨號:CW2105S
額外試劑要求:
無水乙醇,異丙醇。
產(chǎn)品組分:
實驗前準(zhǔn)備:
1.所有組分可在干燥、室溫(15-30℃)環(huán)境穩(wěn)定保存1年,更長時間保存可置于2-8℃,加入RNase A的Buffer P1 置于2-8℃可穩(wěn)定保存6個月。
2.第一次使用前,將RNase A溶液全部加入到Buffer P1中,混勻,置于2–8℃保存,使用前需在室溫中放置一段時間,恢復(fù)至室溫后使用。
3.第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在Buffer PW中加入無水乙醇。
4.使用前請先檢查Buffer P2 和Buffer E3是否出現(xiàn)結(jié)晶或沉淀,如有結(jié)晶或沉淀現(xiàn)象,可在37℃水浴幾分鐘,即可恢復(fù)澄清。
5.注意不要直接接觸Buffer P2和Buffer E3,使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子。
6.提取質(zhì)粒的量和純度與細(xì)菌培養(yǎng)濃度、菌株種類、質(zhì)粒大小、質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素有關(guān)。
使用說明:
1.取5-15 ml過夜培養(yǎng)的菌液,加入離心管(自備)中,13,000 rpm(~16,200×g)離心1分鐘收集細(xì)菌,盡量吸棄全部上清。
2.向留有菌體沉淀的離心管中加入500 μl Buffer P1(請先檢查是否已加入RNase A),使用移液器或渦旋振蕩器充分混勻,懸浮細(xì)菌沉淀。
3.向離心管中加入500 μl Buffer P2,溫和地上下顛倒混勻8-10次,使菌體充分裂解,室溫放置3-5分鐘。此時溶液應(yīng)變得清亮粘稠。
4.向離心管中加入500 μl Buffer E3,立即上下顛倒混勻8-10次,此時出現(xiàn)白色絮狀沉淀,室溫放置5分鐘。13,000 rpm離心5分鐘,吸取上清,將上清加入過濾柱(Endo-RemoverFM)中(已裝入收集管),13,000 rpm離心1分鐘過濾,將收集管中的濾液轉(zhuǎn)移到離心管(自備)中。
5.向濾液中加入450 μl異丙醇,上下顛倒混勻。
6.柱平衡:向已裝入收集管的吸附柱(Spin Columns DL)中加入200 μl Buffer PS,13,000 rpm離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
7.將步驟5中濾液與異丙醇的混合溶液轉(zhuǎn)移到平衡好的吸附柱(已裝入收集管)中。
8.13,000 rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
9.向吸附柱中加入750 μl Buffer PW(請先檢查是否已加入無水乙醇),13,000 rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液。
10.將吸附柱重新放回收集管中,13,000 rpm離心1分鐘。
11.將吸附柱置于一個新的離心管(自備)中,向吸附膜的中間部位加入100-200 μl Endo-Free Buffer EB,室溫放置2-5分鐘,13,000rpm離心2分鐘。-20℃保存質(zhì)粒。
保存條件:室溫(15-30℃)
產(chǎn)品訂購信息:
品牌 貨號 名稱 規(guī)格
康為世紀(jì) CW2105S EndoFree Plasmid Midi Kit 50 preps
產(chǎn)品名稱:康為世紀(jì) 無內(nèi)毒素質(zhì)粒中提試劑盒
產(chǎn)品貨號:CW2105S
關(guān)于公司:
康為世紀(jì)是主要從事高附加值、高技術(shù)含量的生物試劑的研發(fā)與生產(chǎn),為生命科學(xué)研究、基因檢測和體外診斷用戶提供創(chuàng)新型生物產(chǎn)品和服務(wù)??禐槭兰o(jì)建立了專業(yè)化、集約化、能夠形成自主知識產(chǎn)權(quán)的技術(shù)創(chuàng)新體系和開放式的合作創(chuàng)新平臺,構(gòu)建成了公司完整的研發(fā)創(chuàng)新體系。產(chǎn)品線主要包括分子診斷原料酶、核酸采集與保護(hù)劑、核酸提取試劑盒、分子診斷檢測試劑等,打破了中國生物研究與產(chǎn)業(yè)對進(jìn)口試劑的依賴。
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