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康為世紀 快速DNA無縫克隆預混試劑
產(chǎn)品名稱:康為世紀 快速DNA無縫克隆預混試劑產(chǎn)品貨號:CW3034M英文名稱:One Step Seamless Cloning Mix產(chǎn)品規(guī)格:50 rxns
產(chǎn)品介紹:
DNA無縫克隆技術是一項簡單、高效、快速將插入片段定向克隆至任意載體的任意位點的方法,本產(chǎn)品不依賴于T4連接酶,不受載體和目的片段酶切位點的限制,而直接使用同源重組的方法,采用特殊的酶將任意方法線性化后的載體與線性化載體兩端具有20-25 bp重疊區(qū)域的PCR片段定向重組,50℃反應5-15分鐘即可快速實現(xiàn)1-5個片段的定向無縫隆。
產(chǎn)品名稱:康為世紀 快速DNA無縫克隆預混試劑
產(chǎn)品貨號:CW3034M
產(chǎn)品相關原理:
產(chǎn)品組分:
額外試劑需求:
1.插入片段,特異引物,線性化載體
2.高保真PCR試劑
3.感受態(tài)細胞
4.膠回收試劑盒
5.PCR儀,PCR反應管等。
使用前準備:
插入片段的制備與回收
插入片段的制備可用任意PCR酶擴增,克隆過程不受擴增產(chǎn)物平末端或粘末端(A尾)的影響(重組過程中將被去除,在最終克隆產(chǎn)物中不會出現(xiàn)),但為了減少擴增突變,特別是點突變實驗中,建議使用高保真聚合酶(CW2965 Super Pfx Master Mix)進行擴增。
一般情況下,PCR產(chǎn)物推薦膠回收純化以降低背景比例,如果插入片段來源于質粒模板,且該質粒與重組載體具有相同抗性,需用內切酶Dpn I消化PCR產(chǎn)物,以降低背景,提高陽性率。
相關使用說明:
1.重組產(chǎn)物轉化
克隆感受態(tài)置于冰上解凍,取10ul反應產(chǎn)物加入100 ul感受態(tài)細胞中,輕彈管壁混勻,冰上靜置30分鐘。
42℃水浴熱激90秒,立即置于冰上2-3分鐘。
加入600 ul無抗LB液體培養(yǎng)基,37℃搖床220 rpm培養(yǎng)30分鐘。
5000 rpm離心5分鐘,棄多余培養(yǎng)液,剩余100 ul菌液重懸菌體,用無菌涂布棒
均勻涂布在正確抗性的平板上。
37℃培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)12-16小時。
2.陽性克隆的鑒定
可根據(jù)具體情況,選擇菌落PCR鑒定、提取質粒進行限制性內切酶鑒定或測序鑒定。
保存條件:-20℃,保質期一年。
產(chǎn)品訂購信息:
品牌 貨號 名稱 規(guī)格
康為世紀 CW2020M HiFiScript gDNA Removal RT MasterMix 100 rxns
產(chǎn)品名稱:康為世紀 快速DNA無縫克隆預混試劑
產(chǎn)品貨號:CW3034M
關于公司:
康為世紀是主要從事高附加值、高技術含量的生物試劑的研發(fā)與生產(chǎn),為生命科學研究、基因檢測和體外診斷用戶提供創(chuàng)新型生物產(chǎn)品和服務。康為世紀建立了專業(yè)化、集約化、能夠形成自主知識產(chǎn)權的技術創(chuàng)新體系和開放式的合作創(chuàng)新平臺,構建成了公司完整的研發(fā)創(chuàng)新體系。
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