產(chǎn)品中心
康為世紀(jì) 快速DNA無縫克隆預(yù)混液
產(chǎn)品名稱:康為世紀(jì) 快速DNA無縫克隆預(yù)混液產(chǎn)品貨號:CW3034S英文名稱:One Step Seamless Cloning Mix產(chǎn)品規(guī)格:20 rxns
產(chǎn)品介紹:
DNA無縫克隆技術(shù)是一項簡單、高效、快速將插入片段定向克隆至任意載體的任意位點的方法,本產(chǎn)品不依賴于T4連接酶,不受載體和目的片段酶切位點的限制,而直接使用同源重組的方法,采用特殊的酶將任意方法線性化后的載體與線性化載體兩端具有20-25 bp重疊區(qū)域的PCR片段定向重組,50℃反應(yīng)5-15分鐘即可快速實現(xiàn)1-5個片段的定向無縫克隆。
產(chǎn)品名稱:康為世紀(jì) 快速DNA無縫克隆預(yù)混液
產(chǎn)品貨號:CW3034S
產(chǎn)品相關(guān)原理:
產(chǎn)品特點:
1.15分鐘可以將一個或者多個長、短PCR擴增片段(平/A端) 插入載體。
2.不受載體和插入片段酶切位點的可用性和平端/粘性末端的限制,可以在任意位點進(jìn)行克隆。
3.無縫克隆,插入點不會引入不需要的堿基序列。
4.高效、準(zhǔn)確,克隆陽性率>95% 。
產(chǎn)品組分:
額外試劑需求:
1.插入片段,特異引物,線性化載體
2.高保真PCR試劑(推薦使用康為CW2965 Super Pfx MasterMix)
3.感受態(tài)細(xì)胞
4.膠回收試劑盒(CW2302 快速瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒)
5.PCR儀,PCR反應(yīng)管等。
使用前準(zhǔn)備:
線性化載體的制備回收
選擇合適的克隆位點對載體進(jìn)行線性化,載體線性化方式有兩種:限制性內(nèi)切酶酶切消化,反向PCR擴增。
a.酶切所得線性載體,單酶切或者雙酶切均可,酶切后推薦用PCR產(chǎn)物純化試劑盒或者膠回收試劑盒純化載體。因無縫克隆產(chǎn)品體系中沒有DNA連接酶,所以不會引起載體自連,重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化后出現(xiàn)的假陽性克隆 (無插入片段) 是由酶切不*未線性化環(huán)狀載體轉(zhuǎn)化而形成的,所以我們推薦酶切后膠回收純化,可以將未線性化載體比例降低到低程度。
b.反向PCR擴增得到線性化載體,推薦使用高保真聚合酶擴增,以減少擴增突變
的引入,使用環(huán)狀質(zhì)粒為模板時,建議使用內(nèi)切酶Dpn I對PCR產(chǎn)物進(jìn)行消化,以減少環(huán)狀質(zhì)粒模板殘留引起的克隆假陽性。如果使用Dpn I消化質(zhì)粒模板,需80℃加熱20分鐘失活Dpn I活性,以避免重組反應(yīng)時殘留Dpn I對克隆載體的降解。
相關(guān)使用說明:
1. 線性化載體與插入片段的使用量
載體一般用20-50 ng,插入片段與載體的摩爾比在2:1-3:1之間最佳;多片段連接的情況下,片段與片段之間摩爾比為1:1。
單片段克隆用量
最適克隆載體使用量=(0.02 x 克隆載體堿基對數(shù))ng(0.03 pmol)
最適插入片段使用量=(0.04 x 插入片段堿基對數(shù))ng(0.06 pmol)
多片段克隆用量(2-5個片段)
最適克隆載體使用量=(0.02 x 克隆載體堿基對數(shù))ng(0.03 pmol)
每個插入片段的使用量=(0.02 x 每個插入片段堿基對數(shù))ng(0.03 pmol)
輕輕混勻,在50℃水浴或者PCR儀中反應(yīng)5-15分鐘,超過3個片段的連接,可以延長反應(yīng)時間至30分鐘。反應(yīng)結(jié)束后,將EP管置于冰上降溫后直接轉(zhuǎn)化或者保存于-20℃。
保存條件:-20℃,保質(zhì)期一年。
產(chǎn)品訂購信息:
品牌 貨號 名稱 規(guī)格
康為世紀(jì) CW3034S One Step Seamless Cloning Mix 20 rxns
產(chǎn)品名稱:康為世紀(jì) 快速DNA無縫克隆預(yù)混液
產(chǎn)品貨號:CW3034S
關(guān)于公司:
康為世紀(jì)是主要從事高附加值、高技術(shù)含量的生物試劑的研發(fā)與生產(chǎn),為生命科學(xué)研究、基因檢測和體外診斷用戶提供創(chuàng)新型生物產(chǎn)品和服務(wù)。康為世紀(jì)建立了專業(yè)化、集約化、能夠形成自主知識產(chǎn)權(quán)的技術(shù)創(chuàng)新體系和開放式的合作創(chuàng)新平臺,構(gòu)建成了公司完整的研發(fā)創(chuàng)新體系。
紅榮微再——助力分子診斷新未來
紅榮微再作為RNA、NGS、ctDNA、qPCR的分子診斷專業(yè)供應(yīng)商,以“傳遞科學(xué)價值,服務(wù)科學(xué)研究"為宗旨,努力為客戶提供質(zhì)量可靠、貨美價優(yōu)的分子診斷試劑耗材,與客戶攜手為中國分子診斷的發(fā)展而前行。